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檢測領域:

成分分析,配方還原,食品檢測,藥品檢測,化妝品檢測,環(huán)境檢測,性能檢測,耐熱性檢測,安全性能檢測,水質(zhì)檢測,氣體檢測,工業(yè)問題診斷,未知成分分析,塑料檢測,橡膠檢測,金屬元素檢測,礦石檢測,有毒有害檢測,土壤檢測,msds報告編寫等。

反芻動物成分PCR檢測

發(fā)布時間:2025-06-04

關鍵詞:反芻動物成分PCR檢測范圍,反芻動物成分PCR檢測方法,反芻動物成分PCR試驗儀器

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來源:北京中科光析科學技術研究所

文章簡介:

檢測項目牛源性成分定性檢測、羊源性成分定性檢測、水牛源性成分定性檢測、牦牛源性成分定性檢測、山羊源性成分定性檢測、綿羊源性成分定性檢測、鹿源性成分定性檢測(梅花鹿)、鹿源性成分定性檢測(馬鹿)、鹿源性成分定性檢測(馴鹿)、羚羊源性成分定性檢測(特定種)、駱駝源性成分定性檢測(單峰駝)、駱駝源性成分定性檢測(雙峰駝)、反芻動物通用成分篩查、牛與羊種間鑒別、牛屬內(nèi)種間鑒別(黃牛/水牛/牦牛)、羊?qū)賰?nèi)種間鑒別(山羊/綿羊)、鹿科內(nèi)種間鑒別(梅花鹿/馬鹿/馴鹿)、反芻動物組織源特異性鑒定(肌肉/肝臟/血液/骨粉/
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因業(yè)務調(diào)整,部分個人測試暫不接受委托,望見諒。

檢測項目

牛源性成分定性檢測、羊源性成分定性檢測、水牛源性成分定性檢測、牦牛源性成分定性檢測、山羊源性成分定性檢測、綿羊源性成分定性檢測、鹿源性成分定性檢測(梅花鹿)、鹿源性成分定性檢測(馬鹿)、鹿源性成分定性檢測(馴鹿)、羚羊源性成分定性檢測(特定種)、駱駝源性成分定性檢測(單峰駝)、駱駝源性成分定性檢測(雙峰駝)、反芻動物通用成分篩查、牛與羊種間鑒別、牛屬內(nèi)種間鑒別(黃牛/水牛/牦牛)、羊?qū)賰?nèi)種間鑒別(山羊/綿羊)、鹿科內(nèi)種間鑒別(梅花鹿/馬鹿/馴鹿)、反芻動物組織源特異性鑒定(肌肉/肝臟/血液/骨粉/皮張/毛發(fā)/角)、反芻動物加工狀態(tài)鑒別(生鮮/熱處理/深度水解)、反芻動物DNA提取效率評估、飼料中反芻動物源性污染物篩查、肉制品中反芻動物成分定量分析(牛含量)、肉制品中反芻動物成分定量分析(羊含量)、乳制品中反芻動物源乳成分鑒定(牛奶/羊奶/水牛奶)、乳制品中反芻動物源乳定量分析(牛奶含量)、明膠及膠原蛋白制品中反芻動物源成分鑒定、油脂制品中反芻動物源脂肪成分篩查、寵物食品中禁用反芻動物成分篩查(如瘋牛病疫區(qū)來源)、化妝品中反芻動物源組分鑒定(如胎盤素/膠原蛋白)、中藥材及保健品中反芻動物源材料真?zhèn)舞b別(如羚羊角粉/鹿茸)

檢測范圍

生鮮牛肉及制品(牛排/肉餡/肉丸)、生鮮羊肉及制品(羊排/羊肉卷/肉串)、生鮮鹿肉及制品、混合肉糜制品(牛肉+豬肉/羊肉+雞肉)、肉骨粉及動物飼料原料(魚粉替代物篩查)、寵物干糧及濕糧配方原料、工業(yè)明膠及食用明膠原料膠囊殼果凍布丁酸奶穩(wěn)定劑果醬增稠劑糖果涂層藥用輔料照相材料粘合劑皮革鞣制劑化妝品增稠劑紡織漿料造紙施膠劑食品包裝膜腸衣火腿腸衣香腸衣膠原蛋白肽粉保健品膠囊片劑沖劑口服液醫(yī)用敷料止血材料組織工程支架骨修復材料生物墨水乳清蛋白粉酪蛋白酸鈉嬰兒配方奶粉成人奶粉奶酪黃油奶油冰淇淋煉乳酸奶發(fā)酵乳乳飲料含乳飲料植物奶混合奶制品牛羊油脂工業(yè)油脂生物柴油原料肥皂飼料添加劑肥料有機肥土壤改良劑皮革制品皮鞋皮包皮帶皮衣裘皮大衣毛毯羊毛衫羊絨衫羽絨服填充物疑似物中藥材飲片粉末羚羊角鹿茸鹿角霜阿膠龜甲膠雜皮膠血余炭角類工藝品骨雕角雕標本生物標本考古遺骸法醫(yī)物證環(huán)境樣本土壤沉積物水體濾膜飼料廠生產(chǎn)線殘留物食品加工設備拭子運輸工具殘留物餐飲廚余垃圾

檢測方法

本領域主要采用基于DNA分子生物學技術的聚合酶鏈式反應(PCR)及其衍生方法進行特異性檢測。***DNA提取與純化:**依據(jù)樣品基質(zhì)特性選擇相應方法。固體樣品(肌肉/組織/飼料)采用蛋白酶K消化結合酚-氯仿抽提或商用硅膠膜柱純化試劑盒;液體樣品(奶/油)需離心富集或特殊裂解緩沖液處理;深加工樣品(明膠/水解蛋白)需優(yōu)化裂解條件提高碎片DNA回收率;含抑制物樣品(皮革/土壤)需加強純化步驟或稀釋處理。提取的DNA需通過紫外分光光度計或熒光染料法測定濃度與純度(A260/A280比值),必要時進行瓊脂糖凝膠電泳評估完整性。***常規(guī)PCR:**針對特定反芻動物物種(如牛Bostaurus,綿羊Ovisaries)或類群(反芻亞目Ruminantia)的高度保守且特異的基因序列設計引物。常用靶基因包括線粒體細胞色素b基因(Cytb)、線粒體12SrRNA基因(12SrRNA)、線粒體16SrRNA基因(16SrRNA)、核基因組生長激素基因(GH)、核基因組肌間線蛋白基因(Desmin)等。反應體系包含TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物對、模板DNA及緩沖液。經(jīng)變性(94-95C)、退火(引物特異性結合溫度,通常50-65C)、延伸(72C)的循環(huán)擴增后,產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳分離,溴化乙錠(EB)或更安全的熒光染料染色,紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察特定大小條帶判斷結果。***實時熒光定量PCR(qPCR):**在PCR反應體系中加入熒光報告基團(SYBRGreenI染料法或TaqMan探針法),實時監(jiān)測擴增過程中熒光信號累積。SYBRGreenI法成本較低,需熔解曲線分析確認產(chǎn)物特異性;TaqMan探針法特異性更高,利用探針水解釋放熒光。qPCR可進行絕對定量(通過標準曲線計算目標DNA拷貝數(shù))或相對定量(比較Ct值),用于測定樣品中特定反芻動物成分的含量比例(如牛肉摻假比例)。***多重PCR(MultiplexPCR):**在同一反應體系中加入多對針對不同目標物種或內(nèi)參基因的特異性引物,通過優(yōu)化引物濃度和退火溫度實現(xiàn)單次擴增同時檢測多個目標。常用于物種鑒別(如同時區(qū)分牛、羊、豬)或摻假篩查。***數(shù)字PCR(dPCR):**將反應體系分割成大量微反應單元進行獨立擴增,終點通過統(tǒng)計陽性微滴數(shù)進行絕對定量。對復雜基質(zhì)抑制物耐受性強,定量精度高,尤其適用于痕量目標DNA或高度降解樣品的精確定量。***物種特異性引物設計驗證:**所有引物均需通過生物信息學比對確保特異性(BLAST搜索),并使用包含目標物種及近緣非目標物種的參考樣本進行嚴格的實驗室驗證(特異性測試),以及靈敏度測試確定最低檢出限(LOD)。

檢測標準

GB/T20190-2006飼料中牛羊源性成分的定性檢測聚合酶鏈式反應(PCR)法
GB/T21101-2007動物源性飼料中哺乳動物源性成分定性檢測方法實時熒光PCR方法
GB/T21102-2007動物源性飼料中駱駝源性成分定性檢測方法PCR方法
GB/T21103-2007動物源性飼料中鹿源性成分定性檢測方法PCR方法
GB/T21104-2007動物源性飼料中哺乳動物源性成分定量測定實時熒光PCR方法
GB/T38164-2019常見畜禽動物品種及其制品摻假的快速鑒定PCR法
SN/T1119-2002進口飼料添加劑牛羊源性成份的檢測方法PCR方法
SN/T2051-2008食品、化妝品和飼料中牛羊豬源性成分檢測方法實時PCR法
SN/T3731.4-2013食品及飼料中常見畜類品種的鑒定方法第4部分:鹿成分檢測PCR法
ISO20836:2021Microbiologyofthefoodchain—Polymerasechainreaction(PCR)forthedetectionofmicroorganisms—Thermalperformancetestingofthermalcyclers
ISO20837:2006Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Polymerasechainreaction(PCR)forthedetectionoffood-bornepathogens—Requirementsforsamplepreparationforqualitativedetection
ISO22118:2011Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Polymerasechainreaction(PCR)forthedetectionandquantificationoffood-bornepathogens—Performancecharacteristics
AOACOfficialMethodSM2013.05DNA-BasedIdentificationofBovine,Ovine,Caprine,andPorcineMaterialsinMeatandFeedProductsUsingReal-TimePCR

檢測儀器

***樣品前處理設備:*****冷凍研磨儀/均質(zhì)器:**用于高效粉碎冷凍或堅韌樣品(肌肉組織、骨骼、皮革),確保樣本均一性利于后續(xù)DNA釋放。***高速冷凍離心機:**用于樣品裂解后的固液分離,沉淀雜質(zhì)或富集細胞碎片/DNA復合物。***恒溫水浴鍋/金屬?。?*提供精確恒溫環(huán)境用于蛋白酶K消化等溫育步驟。***漩渦混合器:**快速混勻液體樣品與裂解液/試劑。***微量移液器(單道/多道):**精確移取微量液體試劑和樣本的核心工具。***核酸提取純化設備:*****核酸自動提取儀:**基于磁珠法或硅膠膜柱法原理自動化完成裂解液轉移、結合、洗滌和洗脫步驟,提高通量并減少人為誤差。***臺式離心機(微量):**用于硅膠膜柱法核酸提取過程中的離心步驟。***真空抽濾裝置(可選):**配合某些柱式提取試劑盒使用。***核酸濃度與純度分析設備:*****紫外可見分光光度計(微量比色皿):**測量DNA溶液在260nm和280nm處的吸光度(A260/A280),評估濃度和純度(蛋白質(zhì)污染)。***熒光分光光度計/QubitTM系統(tǒng):**使用高靈敏度熒光染料(如PicoGreen,QubitdsDNAHSAssay)專一性結合雙鏈DNA進行精確定量,尤其適用于低濃度或含雜質(zhì)樣本。***瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)(電源+電泳槽):**DNA質(zhì)量初步評估工具,通過電泳分離觀察條帶大小和完整性判斷降解程度。***聚合酶鏈式反應(PCR)核心設備:*****普通PCR儀(梯度功能):**提供精確的溫度循環(huán)控制(變性-退火-延伸),用于常規(guī)終點法PCR擴增。梯度功能便于優(yōu)化不同引物的退火溫度。***實時熒光定量PCR儀(qPCR儀):**PCR擴增與熒光信號實時監(jiān)測一體化設備。配備多個光學通道可同時監(jiān)測多種熒光染料(SYBRGreenI,FAM,HEX,VIC,ROX等)。用于定量分析(qPCR)和高特異性探針法(TaqMan)實驗。***數(shù)字PCR儀(dPCR儀):**將反應體系分割成數(shù)萬至數(shù)百萬個微滴或微孔進行獨立擴增的設備。通過終點熒光信號計數(shù)實現(xiàn)絕對定量,無需標準曲線。***擴增產(chǎn)物分析設備:*****瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)+UV凝膠成像系統(tǒng)/藍光透射儀:**PCR產(chǎn)物最常用的分析方法。電泳分離后,通過EB或其他安全染料染色,在紫外光或藍光激發(fā)下成像觀察特定大小條帶判斷結果。***毛細管電泳儀(CE):**用于高分辨率分離和精確大小測定多重PCR產(chǎn)物或微衛(wèi)星標記片段,自動化程度高,數(shù)據(jù)數(shù)字化記錄。***輔助設備與環(huán)境控制:*****超凈工作臺/PCR工作站:**提供潔凈操作空間并進行紫外線消毒,最大限度降低氣溶膠污染風險。***超純水系統(tǒng):**制備無核酸酶(DNase-free)、無RNA酶(RNase-free)的超純水用于配制試劑和溶液。***冰箱(-20C/-80C):**-20C儲存常用試劑(DNA模板短期保存);-80C長期保存珍貴樣本和標準品。***制冰機:**提供實驗所需的碎冰。***數(shù)據(jù)分析計算機與軟件:**qPCR/dPCR儀器配套軟件用于實驗設置、數(shù)據(jù)采集與分析(Ct值計算,標準曲線擬合,拷貝數(shù)計算,熔解曲線分析);凝膠成像系統(tǒng)軟件用于條帶分析;通用軟件進行數(shù)據(jù)管理和報告生成。

檢測流程

1、咨詢:提品資料(說明書、規(guī)格書等)

2、確認檢測用途及項目要求

3、填寫檢測申請表(含公司信息及產(chǎn)品必要信息)

4、按要求寄送樣品(部分可上門取樣/檢測)

5、收到樣品,安排費用后進行樣品檢測

6、檢測出相關數(shù)據(jù),編寫報告草件,確認信息是否無誤

7、確認完畢后出具報告正式件

8、寄送報告原件

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